在生物医学研究和生物技术应用中，细胞活率的检测是一个至关重要的环节。无论是在细胞培养、药物筛选，还是细胞治疗产品的质量控制中，准确评估细胞活性都是确保实验成功的关键。谈到细胞活率检测，许多人首先会想到经典的台盼蓝染色法。由于其操作简单且成本低廉，已成为实验室的“标配”方法。

然而，台盼蓝染色法并不完美，它只能反映细胞膜的完整性，无法准确表现细胞的代谢状态。此外，该方法对细胞有一定的毒性，长时间染色可能会影响细胞活性，操作中也可能出现误差。那除了台盼蓝，还有哪些方法可以更全面、更精准地鉴定细胞活率呢？本文将介绍四种常用的细胞活率检测技术，并深入分析它们的优缺点，帮助大家根据不同实验需求更好地选择合适的计数方法。

CCK-8法

CCK-8试剂（Cell Counting Kit-8）中含有WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐），这是一种淡黄色水溶性染料，能够被活细胞内的线粒体脱氢酶还原为水溶性的橙黄色甲臜产物（甲瓒）。通过测定甲臜的吸光度，可以间接反映细胞的活率和增殖能力。

EVO视讯的CCK-8法具有灵敏度高的优点，适合高通量筛选，并能反映细胞的代谢活性。但需要特定的仪器（如酶标仪）来测定吸光度，实验步骤相对较多，耗时较长（15h-4h）。

荧光染料法

该方法利用荧光染料（如PI碘化丙啶、Calcein-AM等）标记细胞，其中PI只会进入死细胞，与DNA结合后发出红色荧光，而Calcein-AM在活细胞中代谢后会发出绿色荧光，可通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，以区分活细胞和死细胞。

荧光染料法的优点在于灵敏度高、结果准确，适合复杂样本（如混合细胞群体）的检测，但需要昂贵的仪器，并且某些荧光染料可能对细胞有毒性，因此操作相对复杂，更适合有经验的实验人员。

ATP检测法

ATP（三磷酸腺苷）是细胞能量的直接来源，活细胞中的ATP含量较高，而死细胞中的ATP含量很低。通过检测细胞中ATP的含量，可以间接反映细胞活率。

这种方法灵敏度极高，能迅速检测微量细胞，适合高通量筛选，并能反映细胞的代谢状态。不过，它需要特定的试剂盒和仪器（如化学发光仪），成本较高，不适合大规模使用，同时对样本的处理要求较高，需避免ATP的降解。

克隆形成试验

克隆（集落）试验用于评估细胞的增殖能力、侵袭性及对杀伤因素的敏感性。细胞克隆形成率，即细胞接种后的存活率，是衡量接种细胞贴壁后能否成活并形成克隆数量的重要指标。需要注意的是，并非所有贴壁细胞都能增殖并形成克隆，只有既贴壁又具有增殖活力的细胞才能形成克隆。当单个细胞在体外增殖超过6代时，其形成的细胞群体称为集落或克隆，通常每个克隆包含50个或更多的细胞。通过计算克隆形成率，可以对单个细胞的增殖潜力进行定量分析。这些技术在抗肿瘤药物敏感性试验和肿瘤放射生物学试验中尤为常见。

细胞活率的鉴定是生物医疗实验中的基础环节，而选择合适的方法至关重要。每种方法都有其独特的优势与局限性，实际应用时需根据实验需求、设备条件和样本特性灵活选择。你在实验中更倾向于使用哪种方法呢？欢迎留言分享你的经验！